ELISA試劑盒樣本的收集和處理方法

樣本處理方法匯總表

一、液體樣本

        液體樣本處理原則：所有的液體樣本，用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），如果以后碰到其他的液體樣本，也按這個方法，納入?yún)R總表。

1、血清：用無菌管收集，室溫血液自然凝固10-20分鐘，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3、尿液：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

4、胸腹水：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5、腦脊液：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6、唾液：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

7、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

8、牛奶：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

9、蜂蜜：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

10、全血：用含有抗凝劑的無菌管收集，立即輕輕搖動，來回輕輕顛倒數(shù)次，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝固。

二、固體樣本

        固體樣本處理原則：稱取1g的固體樣本，用9g的合適緩沖液溶解，分泌蛋白可以直接離心取上清檢測，細(xì)胞內(nèi)的蛋白，要先收集細(xì)胞，再用合適方法破碎，離心取上清測試。

1、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。對于植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨；

2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本

許多待測蛋白不是分泌蛋白，而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白，這個時候，要先收集細(xì)胞，洗滌干凈，再破碎細(xì)胞，離心取上清。

（1）培養(yǎng)的細(xì)胞

A、動物細(xì)胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融（如果反復(fù)凍融，破碎效果不好，就采用超聲波破碎），以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

B、植物細(xì)胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右，置于冰盒上，用超聲破碎儀，設(shè)置破碎2s，冷卻30s的方式，充分破碎細(xì)胞，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）組織的細(xì)胞

切割標(biāo)本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。

3、土壤：稱取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細(xì)胞內(nèi)蛋白，要破碎細(xì)胞。

4、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子頭部，搖勻，用鑷子取出咽拭子并擠干液體，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細(xì)胞內(nèi)蛋白，要破碎細(xì)胞。

6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定：（粗提?。?/span>
1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨；
2、 加入樣品體積9倍的提取液（pH 7.4 PBS緩沖液）,

3、 請于4度，8000rpm，離心30分鐘，取上清并暫時保存于4度待用。

三、樣本收集注意事項

1、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實驗，若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、我們羅列的是通用的樣本處理方法，無法涵蓋各種樣本，對于一些特殊樣本，建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn)，自行設(shè)計合理的樣本處理方法。

計算方法示例：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。將樣本的OD值為X值代入方程式，所得的Y值即是我們的樣本值。（如上圖所示）