ELISA間接法不能直接用酶標(biāo)記的原因何在?

在ELISA實(shí)驗(yàn)中，用間接法測(cè)定抗體，不能直接將待測(cè)抗體直接用酶標(biāo)記，然后直接加底物。而要加酶標(biāo)抗抗體呢？

如果將酶標(biāo)記到待測(cè)抗體上，相對(duì)經(jīng)典的間接法更加繁瑣，而且您在摸索標(biāo)記條件時(shí)不能保證操作失誤導(dǎo)致待測(cè)抗體失活；酶標(biāo)二抗現(xiàn)在是已經(jīng)商品化了的，被大規(guī)模生產(chǎn)，購(gòu)買后使用方便。如果你的間接做的好的話，方法被優(yōu)化了后，一抗二抗顯色，總共的時(shí)間加起來(lái)，出結(jié)果不會(huì)超過(guò)2-3小時(shí)。

可以用直接ELISA法，就是用抗體包板，在抗原上標(biāo)記酶，然后顯色，這樣與間接法相比就減少了一步，縮短了時(shí)間。

但是，直接法和間接法，他們各有優(yōu)缺點(diǎn)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求而定。
1、待測(cè)抗體一般是免疫后產(chǎn)生的抗體，其中有免疫失敗和抗體過(guò)少等因素存在，用酶標(biāo)記有許多不確定性，如用酶標(biāo)記前期有測(cè)不出效價(jià)的可能，造成不必要的困惑。

2、ELISA酶聯(lián)免疫中酶標(biāo)抗抗體和抗體結(jié)合后有巨大的信號(hào)放大作用，可以將信號(hào)擴(kuò)大千倍以上，適合于較低抗體量的測(cè)定。

3、ELISA試劑盒SCI文章篩出單抗后可以考慮直接酶標(biāo)抗體，不過(guò)在確定測(cè)定體系上要費(fèi)不少功夫。

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